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从脱气机出来的流动相进入高压泵许多情况下，泵的问题都反映在压力上，压力波动是常见的一类问题，泵的正常压力波动一般在2%以内，这个异常波动通常是由于气泡和盐引起的：如果流动相中的气泡没有被脱气机除掉，那么就会引起压力波动，通常我们可以通过重新 purge流和再脱气流来解决。由于盐引起的波动，主要是由于流动相中添加了浓度较高的缓冲盐，在含盐流动相和有机相中，盐会发生微小的析出，从而引起压力异常波动，解决这些问题可以考虑适当降低盐的浓度，或者用代替有机相。若因各种原因必须使用此流动相，可考虑在有机相中加入一定比例的水，然后适当提高梯度结束点。

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替代流动相的过程有时会发生在泵的使用过程中，取代流动相是指取代正相溶剂，或反过来取代溶剂的过程，这个过程重要的是与流动相的兼容性，常用的正反相色谱溶剂是不可互溶的，所以在更换中间，一定要用异冲洗系统，保证管路中所有原有的溶剂都被异取代。流程继续进行进样，进入进样器，进样器分为手动和自动两类。

HPLC的 HPLC经验：【1】泵压跳动，跳动范围约10 bar。对策：原来的小白头有点脏，换了之后还没有解决；2、将主动阀上的阀芯取出后，发现类似气泡存在，在超声5分钟内浸入-水溶液中试着除去气泡，重新安装后观察，仍未解决；更换新阀芯，安装完毕后，再也没有跳动，观察一段时间后比较平稳，顺利解决。【2】失败原因：①plug homing over pressure②注浆和设流速时，无压力，无液体流出③检光闸不能复位④进完大浓度样品后，进空白相应位置也出峰。

起因：①在线过滤堵塞②泵头下订单向阀堵住③检测池很脏，也有可能是光路有些堵，再不行可能是灯寿命到了④抹布脏了，需要更换。对策：①在线滤网卸下，置烧杯，加纯化水煮沸5-10分钟后，超一下一般就可以了，如果还堵的话就拿稀泡，还不行，就换新的，这是个消耗品②将泵头下端向阀卸下，两个都可能堵死，刚卸下来时竖在耳边摇晃就听不到声音了。只要简单地拿起洗耳球将单向阀吹一次(注意方向)，吹了没反应可以拿溶剂超声检查，但不可用水煮，一般超至在耳边摇能听到声音就不会影响到。③先用溶剂将检测池冲洗一下，具体的试样用什么试样；若不冲洗，将检测池卸下，看灯能量，若能量还可以(有个几千)，可能得清洗光路。首先还是请工程师来清洁，因为要清理的零件在探测器下面有一个黑色的碎片，中间有一条缝，而且那一块的螺丝都是八角的，卸起来很麻烦。④拿出5个样品盘，可以看到里面有一个黑色凸起(看不清是用电筒)，平时进样针就是从那个地方吸的。伸手就能卸下来，里面有一个小白圈(用多了自然就黑了)，换一个新的就好了，一般只有10个才能买仪器。

用不同的方法对色谱柱会有不同的要求，但是每一种色谱柱都有其清洁要求，这在色谱柱上可以找到，必须按照以上的要求来进行，否则会导致色谱柱效下降，色谱柱的使用寿命缩短，检测波长会因品种的不同而有不同的要求，这里需要指出的是要注意观察检测器灯能量的变化，如基线波动大，活性成分的响应值突然变小等，对检测器电镜能量的变化，要注意观察到检测器中能量的变化，如基线波动大，活性成分的响应值突然变小等，有可能是由于灯的能量不足导致的，所以实际使用时要根据实际情况更换。流动速度也因品种而异，一般为1.0 ml/min，流速不能随意改变，尤其作为 QC人员，但作为研发人员，有时为了摸索条件或进行方法耐用性验证，会改变流速来评估该方法的适用性。对不同品种的进样量也有不同的规定，进样量这个现在都是自动进样，所以进样精密度都是很好的，不用特别强调。

操作员：，作为液相操作人员，必须认真学习夜想说明书，掌握液相硬件和软件的操作，掌握日常维护，掌握基本故障的排除与维修。普通液相的操作规程也是由操作人员起草的，因此只要严格按照操作要求操作，一般都不会出现问题，当然对液相的日常维护维护来说，特别是对液相的日常维护保养来说，要注意的是液相的日常维护保养，泵密封垫的清洗、系统的清洗、溶剂过滤头的清洗等方面都不会出现问题，尤其是对液相的日常维护，不会造成不必要的麻烦。第二，操作者在配制液相分析样品时，好由同一人单独完成，以免不必要的意外误差。4、液体安装环境：仪表应尽量安装在水平位置，远离振动、电磁干扰的屋内，有条件时尽量把液相数据处理系统分开，一方面是防止色谱基线噪声太大、基线不稳等，一方面是为了减少对人体的危害。

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不完全分离

①一些峰相重叠，不能分开。治理措施：降低载风量，减少进样量，降低柱温。对能原能完全分离，用一段时间后便不能完全分离，说明固定液流失了，柱子寿命已长，需要更换固定液。②过长的分离时间导致晚馏出的峰变平。处置：可通过升高柱温来解决。③检测器灵敏度太低，无法检测含有少量成分的成分。解决办法：可增加进样量，提高检测器灵敏度等方法。

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五峰形不规则

①出现拖尾峰。方法：采用强极性固定液，去除担体活性，提高柱温解决。②出现平顶形或锯齿状峰。通过减少进样量、提高柱温和载气流量等方法解决。此外，当放大器输入饱和时，也会形成平。