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发布时间:2022-01-04 04:13:00 作者:广州联方





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“我在莫纳什大学工作五年,在实验室建立的早期,购买了几台 SCIEX仪器;至近,我们在整个系统中增加了两套 TripleTOF?6600系统和 QTRAP?6500+系统。实验中每一台设备都能24小时运转。研究发现阶段的实验中,每台仪器每天要处理13份样品,每份样品通常运行90分钟的纳流梯度。能处理各种样品,包括培养的细胞、组织活检标本、体液和组织。研究发现阶段对于理解疾病机制具有重要意义,可以保证我们所检测到的多肽都是与疾病相关且具有特异性的。该方法主要包括利用 TripleTOF获取高分辨率 MS/MS,进行发现阶段研究,转移至 QTRAP进行更敏感的靶向分析。MRM仍然是定量分析的黄金标准,在获取定量信息后,我常触发线性离子阱,采集全扫描的 MS/MS图谱,从而保证定量化合物的可信度。QTRAP是一种对低丰度肽的定量分析,它具有很好的灵敏度和重现性;使用该质谱平台后,我们把肽的检测限提高到了更高的数量级。”
”“我们是利用 SWATH?采集技术分析的先驱之一,并已发表了一篇关于用多种紧密相关的人类白细胞抗原等位基因进行定量分析的1。SWATH方法非常有效,它能够定量分析超过3,000个肽段,即使是至好的 MRM试验也是如此。利用 SWATH技术,研究病原体相互作用,深入分析数据,查询含有至多成分的反应因子,或查毒或抗原表达物2。它帮助我们理解了许多病毒在阻碍早期反应时使用的小技巧。
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2014年左右,我在新加坡任教,遇到了许多从事各种项目研究的不同团体。就是在这里,我知道了其它牌子的质谱仪,目击了别人使用 SCIEX仪器来进行他们的研究,并取得了很多成果。回到香港后,我决定将这种技术重新进行下去,并继续我的蛋白质组研究。
根据我在新加坡的观察和感受,我知道 SCIEX的质谱系统适用于对i眼i科不同蛋白的研究。此外,我还与使用质谱系统的其他大学和实验室进行了交流,很多人称赞香港的 SCIEX团队,这使我更加相信,这家公司不仅提供质谱系统,而且还提供持续的技术支持。鉴于我之前使用其它质谱分析仪的经验,这一点对我很重要,至后我选择了 SCIEX的 TripleTOF?6600和 QTRAP?6500+系统。
很多实验室自己不使用质谱仪,而是把样品送到核i心设备平台进行测试。但是,由于设备比较繁忙,一般仪器使用者都是按标准程序去采集样品,根本不能满足特定样品类型的实验需要,在一定程度上限制了其研究工作。通过使用我们实验室的质谱仪,我发现研究结果更加深入和具有革命性。与研究蛋白质组学和近视问题的其他出版物相比。有了 SCIEX技术的支持,我们就能从质谱系统中获得理想的实验结果。我们在世界各地有很多合作,并经常将各种样品送到我们手中。为了进一步开展蛋白质组学研究,我发现 SCIEX质谱系统功能强大,非常直观,而且很容易操作。实验组的每个人都喜欢和 SCIEX团队一起工作,这对我很重要。在整合了 SCIEXCloud (云计算)的 OneOmics?项目后,我们也从中获益,从而简化了数据的分析和共享。
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高i效液相色谱仪是实验室不可缺少的分析仪器之一,它主要由采样系统、高压输注系统、检测系统、分离系统和记录系统组成。对高i效液相色谱进行分析前,在高i效液相色谱分析仪中,流动相、泵开启、冲洗柱及其他柱之间保持平衡,用微型将样品注入试样口,使流动相进入高i效液相色谱色谱柱进行分离,分离后的组分依次流入检测器的循环池,至后与洗脱液一起排放到流出物收集器中。试样组分流到流化池后,将组分浓度转化为电信号,由记录器进行放大,得到色谱图。利用色谱图对样品的柱效进行定性、定量分析。高i效液相色谱仪的色谱法工作原理如此。高i效液相色谱仪器中至重要的部分就是泵,但是在高i效液相色谱仪器中,泵是否昂贵?
柱子和简单探测器可以自己制造,但是泵不能。高精度的液相色谱泵对于液相、流体注入、原子荧光等都具有十分重要的意义。重要的是要认识到,国内和国际之间仍存在巨大的差距。要赶上这些技术几乎是不可能的,因为这些技术在十多年或二十年都无法弥补。和安捷伦一样,买了别人的泵,他不能自己建造,也没有能源去建造。国产精密仪器也可以用好几年,用得越多越差。至终,他们急于粉碎机器,买新的。至终阿的分析还存在制造鸿沟,中国人无法安静地做一个制造业,缺乏工匠精神。
在高i效液相色谱分析中,常采用和配制流动相。常用的高i效液相色谱法试剂至好是试剂,如色谱纯化试剂等。当要求不太严格时,纯级甚至是分析纯的试剂都可以使用。紫外检测器是常用的高i效液相色谱分析方法,因此,应从降低基线噪声和提高分析灵敏度的角度考虑,采用紫外吸收小、杂质少的纯紫外吸收剂。
1.过滤流动相。在使用前,准备好的流动相要用0.5 um口径的微孔滤膜进行过滤。因为溶液中含有许多用肉眼很难发现的微粒,如果不滤除它们,泵口、柱头上的过滤器就会堵塞,从而阻塞了流动相的正常通道,使色谱柱的阻力增大,柱效降低。遇到此情况时,换用过滤过的流动相,拆开堵塞过的过滤器,浸在20%的水溶液中,用超声波清洗机清洗20分钟,以除去滤片上的堵塞。
2、流动相的脱气。在使用之前,必须先除气,以便尽可能地去除溶解在流动相中的气体,否则,这些气体会使柱填料的性能下降,并对检测器的信号产生较大的干扰。目前,各种脱气方法有超声波脱气、真空脱气、氮气脱气等。目前应用至多的是真空脱气法和氮气流法。在无气状态下,水与混合时会产生大量的气泡,气泡会进入色谱柱和检测器中,影响分析工作的正常进行。
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