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发布时间:2022-02-22 03:01:00 作者:广州联方





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蛋白组学在疾病机制阐述、快速诊断、医学等领域有着广阔的应用前景,但目前大多数蛋白质组学方法都是面向小范围、低通量的科研型应用方法。面临着这种瓶颈, 有个和他的同事们正在利用 SCIEX至近发布的 ScanningSWATH采集技术来解决这个问题。
该是生物代谢组学领域的人物之一,目前在德国柏林夏里特大学医学院生物化学研究所和英国伦敦弗朗西斯·克里克研究所代谢分子生物学实验室工作。该团队致力于细胞稳态及其对外界刺激的反应机制的研究,旨在进一步阐明代谢途径的机制和寻找潜在的药靶点。它们和 SCIEX保持了长期的合作关系,利用 SCIEX质谱仪对大队列样品进行了蛋白质定量。这个解释说:“我们需要监控蛋白质表达和测蛋白翻译后修饰的细微变化,但在我们的研究中,这要求我们定量非常别的样本,这是一个传统的蛋白质组实验室很难的规模。多年来,我们的团队一直与 SCIEX紧密合作,致力于寻找创新的方法来发展高通量蛋白质分析新策略。同样,通过与 SCIEX的合作,我们可以很幸运地接触到一系列令人兴奋的和应用程序。至新的技术是 ScanningSWATH采集模式,它已经被证明是一种非常适合在高通量蛋白质组学中使用的方法。
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面临着样品量较大的常规检测,实验室对方法的重复性要求很高,而有的实验室对实验方法的研究开发过程漠不关心,需要的是快速实现检测目的。刘华芬说:“在真实、复杂的样品基体中的方法具有良好的可重复性,这是这些用户至需要的,我们的解决方案是使这种用户可以简单、准确地得到想要的数据。
SCIEXLabs通过用户调查发现,“根据 SOP一步一步地获取可靠数据,并不需要很强的技术来获取可靠的数据”,这是一种常规检测方法。刘华芬和 SCIEXLabs这么有信心地说道:“通过我们所提供的方法,用户就可以实现这一既定目标。”是什么使刘华芬和 SCIEXLabs如此自信?
SCIEXLabs的技术人员在投入了大量的研究开发时间的同时,也花费了更多的时间和精力来完成对实验方法的验证。实验室实现方法重新生成后,还将由 SCIEXLabs实验室在其他国家的实验室进行内部验证,并由不同的使用者实验室经过严格的验证。同时,对过程中发现的任何问题和改进建议,也将反映到研发实验室重新优化。当前,只有 SCIEX可以做到这样一个层次的解决方案验证。通过这种改进和验证,刘华芬十分确信,“至终到用户手中的方案就是一个可以再现的易行方案。”
高i效液相色谱法概述:
高i效液相色谱 (高i效液相色谱)作为一种高i效、快速的分析分离技术,在上个世纪70年代得到迅速发展,是现代分离检测的重要手段。层析法的分离原理是:当溶解于流动相(mobile phase)的各组分通过固定相(station phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和),其大小、强弱不同,在固定相中的滞留时间也不同,从而先后从固定相中流出。也叫色层法,色谱法。
高i效液相色谱是从经典的液相色谱方法发展而来,它以液体为流动相,并且采用了微粒细粒高i效固定相的柱层析分离技术。它的分离机理与普通的柱色谱一样,但填料更精细,需要高压泵推动,柱效高,分析速度快。在液相色谱中,流动相也参与了组分的分离过程,其组成、比例和 pH值可以灵活调整,分离方式多样。实践中,对不同样品进行分离,主要是通过改变流动相组成来调节样品在色谱柱的保留程度和选择性。
高i效液相色谱技术自上世纪60年代出现以来,由于采用了高压输液泵、全多孔微粒填充柱和高灵敏度检测器,实现了对样品快速、高i效、灵敏的分离检测。高i效液相色谱技术的引入,使液相色谱吸收了经典液相色谱的发展经验,大大提高了仪器的自动化水平和分析精度。目前采用微处理器控制的液相色谱系统,不仅自动化程度高,而且可以控制仪器的操作参数(如溶剂梯度洗脱、流动相流量、柱温、自动进样、洗脱液收集、检测器功能等),同时还可以缩放、叠加得到的色谱图,并对保留的数据和峰高、峰面积进行处理等,为色谱分析工作者提供了一种、全功能的分析工具。
储存色谱柱。如暂时不使用色谱柱,应注意下列事项:
A.在短时间内的放置过程中,首先要用溶剂冲洗色谱柱(如用蒸馏水冲洗凝胶柱),然后用密封螺钉将色谱柱的两头密封。
b.如果色谱柱长时间不使用,则不能单用上述方法处理,当使用说明书中指i定的溶剂向色谱柱注满色谱柱,反相柱一般用甲i醇,正相柱可用正已烷或庚烷,凝胶柱不能用水,因为柱中有微生物生长则会使柱效降低,此时应用0.05%的 NaNs水溶液(防腐剂)再将色谱柱进行冲洗。长时间放置色谱柱时,必须确保色谱柱两端密封紧,防止溶剂挥发所致的柱填料干缩现象,因为这会导致柱效严重下降。
C.色谱柱应储存在室温下,如果放置在0℃以下的环境中,色谱柱会被冻结,这也会导致柱效下降。
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